载体 - 景军皮肤康复网

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肺部注射包括鼻内滴注法和气管插管术。鼻内滴注法操作简单，直接将病毒悬液滴入鼻腔，但颗粒可能沉积在上呼吸道，需要较大剂量的病毒。气管插管术能将病毒载体直接输入肺部，避免上呼吸道损失，但需特殊设备和技巧。此外，还有气管内注射，操作与鼻内滴注法类似，但直接注入气管。

麻醉小鼠，确保其对疼痛刺激无反应。2）保护小鼠眼睛，保持湿润并抑制眨眼反射。3）保持小鼠体温，防止麻醉后过低。4）清洁小鼠耳朵，并消毒。5）打开鼓室大疱，暴露镫骨动脉和圆窗膜。6）轻轻在圆窗膜中心穿刺，观察液体流出。7）将0.6~2μL的AAV载体注射至耳蜗鼓阶。

小鼠特异性注射圆窗载体

1、构建基因过表达载体是基因工程的核心，旨在将基因导入载体，确保其在受体细胞中稳定表达。常见的载体有细菌质粒、噬菌体及动植物病毒，其中细菌质粒因自身具备自我复制能力，成为最常用的选择。在准备SUN基因片段与载体结合时，使用VectorNTI工具确定酶处理策略。

2、在大肠杆菌，酵母和哺乳动物细胞中，构建的外源质粒直接导入细胞即可，这个过程称为转化或转染。对于昆虫表达系统，构建的质粒还需要先转座成为杆状病毒基因组才能用于转染。基因过表达的应用：大肠杆菌表达系统，酵母表达系统，昆虫表达系统，哺乳动物细胞表达系统和体外翻译系统（无细胞体系）。

表达质粒基因载体细胞

1、AAV感染不同组织效果图不同AAV血清型的组织亲和性AAV1载体：明显的骨骼肌嗜性（包括心肌），神经组织也可以感染；AAV2载体：泛嗜性；最早应用的AAV载体。

2、AAV1载体则倾向于感染骨骼肌，特别是心肌，同时神经组织也可被感染。这种载体的特异性使得它在某些特定的应用场景中具有优势。AAV5载体则表现出对视网膜、神经系统以及关节滑膜的强烈嗜性，同时它也能够影响肺部的转导。这种特性使其在治疗涉及这些器官的疾病时具有潜在价值。

载体骨骼肌感染组织血清

视网膜下腔注射适用于RPE细胞和光感受器细胞的转导，主要步骤包括麻醉、切口制作、插入注射针、开始注射、缓慢出针，以及避免切口处感染等。此方法可避免触发体液免疫反应，对另一只眼再次视网膜下注射无影响。在选择注射方式时，应考虑疾病的性质，同时选择对小鼠最便利的方式。

AAV因其特异性而成为首选载体，不同血清型针对特定组织有较高感染能力，通过合适注射方法可实现体内特异性表达。实现特异性表达的方法包括选择组织特异性血清型、使用细胞特异性启动子以及局部注射等。