AAV在眼部注射方法有哪些
视网膜下腔注射适用于RPE细胞和光感受器细胞的转导,主要步骤包括麻醉、切口制作、插入注射针、开始注射、缓慢出针,以及避免切口处感染等。此方法可避免触发体液免疫反应,对另一只眼再次视网膜下注射无影响。在选择注射方式时,应考虑疾病的性质,同时选择对小鼠最便利的方式。
AAV因其特异性而成为首选载体,不同血清型针对特定组织有较高感染能力,通过合适注射方法可实现体内特异性表达。实现特异性表达的方法包括选择组织特异性血清型、使用细胞特异性启动子以及局部注射等。
常见问题解答包括:rAAV中枢注射滴度和注射体积一般是多少?滴度10^12 vg/mL,体积200-300nL左右。AAV感染小鼠后多久可以观察结果?一般情况下,三周后可在胞体检测到信号,六周后可在末梢检测到信号。
首先,所有的操作都应在符合相应生物安全等级的实验室环境中进行,确保最大程度的防护。在处理过程中,务必避免直接接触病毒载体,包括通过伤口注射、误食、吸入或接触黏膜。万一发生皮肤接触或溅入眼睛的情况,应立即用大量清水冲洗,以冲洗掉可能沾染的病毒。
更令人瞩目的是,通过双杂合AAV载体,如AAV-VSSSTPR(AAV-VEC)和AAV-NNPLPQR(AAV-NEC),特别是AAV-VEC,研究人员成功实现了vWF基因的表达,这对于治疗血管性血友病等遗传性疾病提供了突破性的治疗手段。